Isolation and characterization of a pandemic H1N1 influenza virus in pigs in Brazil / Isolamento e caracterização do vírus da influenza pandêmico H1N1 em suínos no Brasil

Influenza A virus (IAV) infections are endemic in pork producing countries around the world. The emergence of the pandemic 2009 human H1N1 influenza A virus (pH1N1) raised questions about the occurrence of this virus in Brazilian swine population. During a 2009-2010 swine influenza virus research project at Embrapa Swine and Poultry (CNPSA), an outbreak of a highly transmissible H1N1 influenza A virus disease was detected in a pig herd in Santa Catarina State, Brazil. The virus caused a mild disease in growing pigs and sows without mortality. Three clinically affected piglets were euthanized. Gross lesions included mild to moderate consolidation of cranioventral areas of the lung. Microscopically, the lesions were characterized by necrotizing obliterative bronchiolitis and bronchointerstitial pneumonia. Immunohistochemistry using a monoclonal antibody against type A influenza virus nucleoprotein revealed positive staining in the nuclei of the bronchiolar epithelial cells. Lung tissue from three piglets and nasal swabs from five sows and four piglets were positive for influenza A by RT-PCR. Influenza virus was isolated from one lung, later confirmed by the hemagglutination test (HA titer 1:128) and RT-PCR. Sequence analyses of Hemmaglutinin (HA) and Matrix (M) genes revealed that the virus was consistent with the pandemic (A/H1N1) 2009 influenza virus strain that circulated in humans. This is the first report of an outbreak of pandemic A/H1N1 influenza virus in pigs in Brazil.

A infecção causada pelo vírus Influenza A (IAV) é endêmica em suínos no mundo inteiro. O surgimento da pandemia de influenza humana pelo vírus A/H1N1 (pH1N1) em 2009 levantou dúvidas sobre a ocorrência deste vírus em suínos no Brasil. Durante o desenvolvimento de um projeto de pesquisa do vírus de influenza suína em 2009-2010, na Embrapa Suínos e Aves (CNPSA), foi detectado em um rebanho de suínos em Santa Catarina, Brasil, um surto de influenza altamente transmissível causado pelo subtipo viral H1N1. Este vírus causou uma doença leve em suínos em crescimento e em fêmeas adultas, sem mortalidade. Tres leitões clinicamente afetados foram eutanasiados. As lesões macroscópicas incluiam consolidação leve a moderada das áreas cranioventrais do pulmão. Microscopicamente, as lesões foram caracterizadas por bronquiolite necrosante obliterativa e pneumonia broncointersticial. A imunohistoquímica, utilizando um anticorpo monoclonal contra a nucleoproteína do vírus influenza A, revelou marcação positiva no núcleo das células epiteliais bronquiolares. O tecido pulmonar de três leitões e os suabes nasais de cinco fêmeas e quatro leitões foram positivos para influenza A pela RT-PCR. O vírus influenza foi isolado de um pulmão, mais tarde sendo confirmado pelo teste de hemaglutinação (título HA 1:128) e por RT-PCR. A análise das seqüências de nucleotídeos dos genes da hemaglutinina (HA) e proteína da matriz (M) revelou que o vírus isolado foi consistente com o vírus pandêmico A/H1N1/2009 que circulou em humanos no mesmo período. Este é o primeiro relato de um surto de influenza causado pelo vírus pandêmico A/H1N1 em suínos no Brasil.

Genetic grouping of avian infectious bronchitis virus isolated in Brazil based on RT-PCR/RFLP analysis of the S1 gene / Agrupamento genético de isolados do vírus da bronquite infecciosa das aves no Brasil com base na análise do gene S1 por RT-PCR-RFLP

Twelve Brazilian isolates and one reference vaccine strain of avian infectious bronchitis virus (IBV) were propagated in embryonating chicken eggs. The entire S1 glycoprotein gene of these viruses was analysed by reverse-transcriptase-polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (RT-PCR-RFLP), using the restriction enzymes HaeIII, XcmI and BstyI. The RFLP patterns led to the classification of these isolates into five distinct genotypes: A, B, C, D and Massachusetts. Five of twelve isolates were grouped in Massachusetts genotype and the remaining seven viruses were classified into four distinct genotypes: A (2), B (2), C (2) or D (1). Such genotyping classification agreed with previous immunological analysis for most of these viruses, highlighting the occurrence of a relevant variability among the IBV strains that are circulating in Brazilian commercial poultry flocks.

Doze isolados de campo do Brasil e uma estirpe de referência vacinal do vírus da bronquite infecciosa das aves (VBI) foram propagadas em ovos embrionados SPF. O gene S1 dessas amostras foi analisado por RT-PCR seguido de RFLP, empregando-se as enzimas de restrição HaeIII, XcmI e BstyI. Observou-se a existência de cinco genotipos diferentes: M (Massachusetts), A , B, C e D. Cinco dos doze isolados de campo do VBI foram classificados no genótipo Massachusetts e os sete vírus restantes foram classificados em quatro genotipos diferentes; A (2), B (2), C (2) ou D (1). Os resultados desta genotipagem concordam com os dados obtidos na análise imunológica previamente realizada para a maior parte destes vírus, destacando a ocorrência de uma variabilidade marcante entre os isolados do VBI que estão circulando nas granjas avícolas comerciais do Brasil.

Production of monoclonal antibodies with distinct neutralizing activity against virulent and the attenuated bartha strain of aujeszky's disease virus

Foram produzidos 3 anticorpos monoclonais contra cepa virulenta do vírus da doença de Aujeszky (VDA). Anticorpos monoclonais 2E9 e 1H1 neutralizam o vírus in vitro apenas na presença de complemento. Contudo, nenhum destes anticorpos possui atividade neutralizante contra a cepa Bartha, naturalmente atenuada. Análise por Western Blot contra proteinas do VDA, separadas por SDS-PAGE sem agente redutor, demonstrou que estes anticorpos monoclonais reagem contra uma proteína de peso molecular de 138K, revelada como uma proteina de 68 K quando eletroforese foi com agente redutor. Uma reaçäo muito tênue foi também observada contra uma proteina de 116K em condiçöes de reduçäo. Esses resultados indicam especificidade contra uma proteina complexa ligada por pontes disulfidicas, análoga à proteina gII do VDA. A distinta atividade neutralizante destes anticorpos sugere a presença de diferenças em epitopes neutralizantes desta proteina no vírus atenuado e virulento. Estes anticorpos monoclonais podem vir a ter potencial uso como marcadores para análise comparativa de cepas virulentas e atenuadas do VDA

Ocorrência de anticorpos para vírus aviários em frangos de corte em regiäo de intensa produçäo avícola / Occurrence of antibodies for avian viruses in broilers in a region of high density poultry production

Amostras de sangue foram obtidas ao abate de 60 frangos de corte, de 43 a 56 dias de idade, de cada uma de 60 granjas sem problemas sanitários aparentes localizadas em uma regiäo de alta densidade de produçäo avícola. As granjas correspondiam a 10% do número total que existe na regiäo e estavam localizadas em um raio de 50 km. Todos os frangos tinham sido vacinados contra a doença de Marek no primeiro dia de vida. Os soros foram avaliados no teste de imunodifusäo para anticorpos para reovírus aviário (RVA), vírus da doença infecciosa da bursa (VDIB), vírus da bouba aviária (VBA), vírus herpes de perus (HVT), adenovírus aviário do grupo 1 (AVA-1) e do grupo 2 (AVA-2). Os mesmos soros foram examinados no microteste de soroneutralizaçäo em placas para anticorpos para o vírus da bronquite infecciosa (VBI) e o vírus da laringotraqueíte infecciosa (VLTI), bem como anticorpos inibidores da hemoaglutinaçäo para o vírus da doença de Newcattle (VDN). Anticorpos para RVA, detectados em 2172 (63,6%) de 3418 soros, e para AVA-1, em 2701 (78,2%) de 3456 soros, foram demonstrados em todas as 60 granjas, enquanto que, anticorpos para o VDIB, em 3086 (89,4%) de 3452 soros, foram encontrados em somente 57 destas granjas. Estes resultados indicam que os três vírus säo ubíquos em frangos de corte da regiäo estudada. Anticorpos para o VBA em 14 (0,5%) de 2935 soros, para o VDN em seis (0,2%) de 3320 soros, foram encontrados em cinco de 59 e em uma de 60 granjas, respectivamente, indicando que esses dois vírus ocorrem apenas raramente. Anticorpos para HVT, em 315 (9,0%) de 3484 soros, foram detectados em 39 de 60 granjas testadas, sugerindo resposta sorológica pobre à vacinaçäo e baixa exposiçäo de campo ao vírus da doença de Marek. Anticorpos para o VBI, em 61 (2,1%) de 2925 soros, foram encontrados em 12 de 57 granjas testadas. Porém, em apenas uma granja a percentagem de reagentes era significativa (41%); nas outras 11 granjas a percentagem de frangos com anticorpos variava de 1,7 a 16,1%. Finalmente, näo foram detectados anticorpos em 3491 soros de 60 granjas testada para AVA-2, nem em 3035 soros de 59 granjas testadas para o VLTI, indicando que esses vírus näo existem na área geográfica estudada. O significado de todos os achados é discutido